對于大多數(shù)以碳酸鹽作為pH緩沖體系的培養(yǎng)液，為了維持穩(wěn)定的pH，培養(yǎng)箱中的二氧化碳需要維持在2-10%之間，以維持培養(yǎng)液中溶解的二氧化碳濃度。同時，用于細胞培養(yǎng)的容器需要一定程度的通風，以便于氣體的交換。

細胞培養(yǎng)基中常加入其他pH緩沖體系，如HEPES緩沖體系，以增加pH緩沖容量。HEPES在pH7.2-7.4有很強的緩沖能力。當可呼吸的培養(yǎng)容器從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出時，培養(yǎng)液中的碳酸鹽緩沖體系會因為空氣中二氧化碳濃度低而失去作用。此時HEPES的緩沖體系可以保持pH穩(wěn)定。

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